在细胞培养过程中,了解细胞的活率对于评估细胞健康状态、优化培养条件以及进行药物筛选等实验至关重要。细胞活率的分析方法主要包括镜检法(如血球计数板)、图像分析法、电阻抗法、流式细胞术等,它们各自具有独特的优势和局限性。最常用的方法是图像分析法,图像分析法可以自动拍照和数据分析统计,适应性强,适用于几乎所有类型细胞的检测,图像分析中区别细胞死活的方式主要为台盼蓝染色和AOPI染色。
染色原理
台盼蓝染色和AOPI染色
台盼蓝染色原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色,通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。因此,被染色的细胞为死细胞,没有被染色的为活细胞。
AOPI染色原理:AOPI试剂由AO(Acridine Orange,吖啶橙)和PI(Propidium iodide,碘化丙啶)组成。其中,AO是一种异染性荧光阳离子染料,可渗透细胞膜,并嵌入所有细胞(活细胞和死细胞)的细胞核,检测到绿色荧光。PI不能通过完整的细胞膜,只能进入死细胞的细胞膜,并嵌入死细胞的细胞核,检测到红色荧光。当AO、PI试剂均存在于细胞中,在合适的染料配比下,染料间会发生荧光共振能量转移,致活细胞被激发出绿色荧光,死细胞被激发出红色荧光。
影响因素
结果依赖于实验操作规范
AOPI染色和台盼蓝染色作为细胞实验中评估细胞活力和数量的关键方法,在传统的图像分析法中,其结果是否准确高度依赖于实验人员是否严格遵守操作规范。在AOPI中,染色工作液的配制、细胞样本的处理及检测时的操作细节,任何一环的人为疏忽都可能影响细胞染色效果和最终的分析结果。同样,在台盼蓝染色过程中,细胞悬液的制备、染料的配制与染色时间以及细胞计数的准确性,均受到人为因素的影响,进而影响细胞活力的评估。
自动化解决方案
消除人为操作风险
光学系统
双荧光+明场适应各种染色方式
综上所述,台盼蓝染色法和AOPI染色法适用于不同的实验场景和需求。随着科技的进步,CytScop®系列智能细胞计数仪以其创新技术、高准确性、易操作性和广泛适用性等优点,正在逐渐成为细胞活率分析的首选工具,为生物制品研发和生产提供更加准确、高效、便捷的细胞计数和分析解决方案。
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